计算退火温度的方法：
1.退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）只是粗算，有时不灵，但比较简便。
2.用primer5（oroligo6）计算，引物配对好后，primer5可以显示Tm，我认为这个值就是退火温度，我的经验再加2or3度最好。
3.合成引物的单子上也有个Tm，减去5～8也可，但有些公司提供的Tm就是方法1计算的。我认为方法二最准确，不知道还有其他方法吗？
匿名回答于2019-07-20 16:14:15
退火温度确定的计算公式是：4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）。退火温度（AnnealingTemperature）是指引物和模板结合时候的温度参数，当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。它是影响PCR特异性的较重要因素。
在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。
匿名回答于2021-11-30 03:29:27
